一． 原理

  凱氏法測定樣品中的含氮量，即在催化劑作用下，用硫酸破壞有機物，使含氮物轉化成硫酸銨。加入強堿進行蒸餾使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，測出氮含量，將結果乘以換算系數6.25，計算出粗蛋白含量。

二． 試劑

1)       硫酸：化學純，含量為98%，無氮。

2)       混合催化劑：1g硫酸銅，9g硫酸鉀，均為化學純，磨碎混勻。

3)       氫氧化鈉：化學純，40%水溶液（m/v）。5%水溶液（m/v）

4)       硼酸：化學純，2%水溶液（m/v）。

5)       混合指示劑：甲基紅0.1%乙醇溶液，溴甲酚綠0.5%乙醇溶液，兩溶液等體積混合，在陰涼處保存期為三個月。

6)       鹽酸標準溶液：c(HC1)=0.1mol/L。8.3ml鹽酸（分析純），注入1000ml蒸餾水中。

7)       硼酸吸收液：2%硼酸溶液（20 g/L）：稱取100 g硼酸，加水溶解后并稀釋至5000 mL。加入（1：3.5混合指示劑6ML）搖勻，再加入5%的氫氧化鈉稀釋溶液0.35ML搖勻，顏色呈紫紅色。

三． 儀器設備

1)      實驗室用樣品粉碎劑或研缽

2)      分樣篩：40目（孔徑0.45mm）

3)      分析天平：感量0.0001g

4)      消化爐（SKD-08S2）

5)      容量瓶100ml

6)      滴定管：10、25ml

7)      消化管：300ml

8)      定氮儀(SKD-2000)

四． 樣品的選取和制備

  樣品粉碎后全部通過40目篩，裝于密封容器中，防止樣品成分的變化。

五． 分析步驟

1          樣品的消化

稱取樣品0.5~1g(含氮量5~80mg)準確至0.0002g，放入消化管中，加入5g混合催化劑，與樣品混合均勻，再加入10ml硫酸，將消化管置于消化爐上加熱，直至呈透明的藍綠色，然后在繼續加熱，至少30分鐘。

2          SKD-08S2消化爐

操作（6個樣品和2個空白）

按”SET”鍵+“A/M”鍵3秒，跳出**設置區程序參數修改界面。連續按“SET”鍵數次出來

檢查“RUN”=“3”，pro= “ 1 ”  ，再設置r1 =200，T1=5分鐘，c1=180度，r2=180，T2=5,C2=250度，r3=180， T3=5, C3=350度，r4=200，T4=60，c4=410，r5=0，T5=0,C5=0度。。。。r32=0,t32=0,c32=0,設置好后等幾秒鐘，程序會自動保存。

再打開啟動開關（綠開關）-----------程序自動運行，自動結束。如果出現不運行，再檢查“RUN”設置為“3”，pro= “ 1 ”  。

3          SKD-2000全自動定氮儀

樣品消化好后，冷卻至室溫。

蒸餾設置：堿45ml，稀釋液40ml，標準酸0.0953（mo/l），蒸餾功率100%，蒸餾時間6分鐘，硼酸儀器自動加。

測定結果

平均值：12.8245

RSD（相對標準偏差值）: 0.002%